단백질을 정량적으로 측정할 수 있는 가장 표준화된 방법 ELISA
(Enzyme-Linked Immunosorbent Asssay)

• ELISA는 항체와 항원 반응을 이용해 단백질 같은 물질의 양을 정량적으로 측정하는 검사법
• 항원-항체가 만나면 효소 반응을 통해 색깔이 변하고, 이 색의 세기를 기계가 읽어서 정량화
• 즉, 단백질이 얼마나 있는지를 눈에 보이는 색으로 바꿔서 측정하는 방법
• 플라스틱 plate에 항체를 고정 → 연구자가 시료(혈액, 세포 배양액 등)를 넣음 → 항원(단백질)이 있으면 항체에 붙음 → 효소
  반응으로 색깔 변화 → 단백질의 양을 정량적으로 측정

ELISA가 자주 사용되는 연구 분야

ELISA의 단점

1. Multiplex 불가능
1) 한 번에 하나의 단백질(항원/항체)만 측정 가능
2) 여러 개를 동시에 보려면 샘플과 시간이 많이 필요

3.샘플 소모량이 많음
1) 보통 Kit에 따라 다르지만 50 ~ 100ul 정도 필요 -> 소량 시료(예: 환자 혈액, 마우스 혈액 등) 연구에서 부담

2. 민감도의 한계
1) Microplate leader 기에 따라 그리고 같은 샘플이더라고 민감도의 차이가 발생함

사람들이 여전히 ELISA를 많이 하는 이유

1. 골드 스탠다드 (Gold Standard)
1) 수십 년간 전 세계에서 사용된 “표준화된 방법”
2) 수많은 논문, 임상 데이터가 ELISA 기반으로 축적

2. 장비 부담이 적음
1) Plate leader만 있으면 실험 가능
2) 추가로 고가의 특수 장비가 필요 없음

3. 키트 접근성
1) 거의 모든 단백질 타겟에 대해 상용 ELISA 키트가 존재함

Luminex® xMAP® 기술

MILLIPLEX® 키트는 가장 빠르게 성장하고 가장 인정받는 멀티플렉스 기술인 Luminex® xMAP® 비드 기반 분석 플랫폼을 기반으로 하며, 생명 과학 전반에 걸쳐 응용 분야를 지원합니다.
이 플랫폼은 형광 코딩된 자기(MagPlex®) 비드 마이크로스피어의 표면에서 면역반응을 포함한 다양한 생물학적 분석을 수행할 수 있습니다.

Luminex® 기술은 독점 기술을 사용하여 여러 형광 염료로 마이크로 스피어 내부적으로 색상을 구분합니다.
이러한 염료의 정확한 농도를 통해 500가지의 5.6 μm 비자성 마이크로 스피어로 구성된 뚜렷한 색상의 비드 세트가 특정 포획 항체/항원을 코팅합니다.

테스트 샘플의 표적 단백질이 비드에 의해 포획될 후 비오틴화된 검출 항체가 결합하게 됩니다.

그런 다음 다른 항원들을 포터드 분자인 SAPE 접합체로 배양하여 각 마이크로스피어의 표면에서 반응을 완료합니다.

Luminex® 200™, FLEXMAP 3D® 및 INTELLIFLEX™ 시스템은 레이저, 광학, 고유 유체 공학 및 고속 디지털 신호 프로세서와 같은 주요 xMAP® 검출 구성 요소를 통합한 유세포 분석 기반 기기입니다.

붉은색 레이저 영역 :

분석물의 종류를 파악

초록색 레이저 영역 :

분석물의 농도를 정량

xMAP® 기술을 활용한 다중 면역분석

MILLIPLEX® 구성품

MLLIPLEX 만의 차별점
1) Bead diluent – 위양성 방지
2) Serum Matrix – 측정 정확도의 향상
3) QC1 & QC2 – standard curve의 신뢰도 검증

Specifications

* DR-SE = 듀얼 리포터 사이드 배출 (Dual Reporter Side Eject), **RP = 리포터(Reporter).